熒光定量PCR儀(Real-time Fluorescence Quantitative PCR,簡稱qPCR儀)是一種集精密溫控、光學檢測與數據分析于一體的分子生物學分析儀器,用于在PCR擴增過程中實時監測目標DNA或RNA的擴增量,從而實現對初始模板的精確定量。其工作原理基于熒光信號的累積:在PCR反應體系中加入熒光染料(如SYBR Green)或序列特異性熒光探針(如TaqMan探針),隨著每一輪擴增,新合成的雙鏈DNA結合熒光物質并發出信號,儀器通過高靈敏度CCD或光電倍增管實時采集各孔熒光強度,生成擴增曲線。通過設定閾值循環數(Ct值),結合標準曲線,可計算出樣品中目標核酸的初始拷貝數,實現絕對或相對定量。
熒光定量PCR儀的保養方法可分為以下幾檔:
1、每次使用后(日常維護)
清潔反應模塊:待模塊降溫至室溫后,用無塵棉簽或軟布蘸取少量70%-75%乙醇,輕輕擦拭樣品孔底部和邊緣,清除溢出的反應液、封板膜碎屑或礦物油。嚴禁液體直接倒入模塊,也不可用尖銳硬物刮擦(易損傷涂層和溫度傳感器)。
擦拭熱蓋:用酒精或純水擦拭熱蓋底面,確保無污漬,保證與管蓋緊密貼合,防止樣品蒸發。
外殼清潔:用微濕軟布擦拭儀器外殼,若有試劑濺出及時用70%酒精擦凈,且液體不能流入儀器縫隙。
規范關機:實驗結束建議待機10分鐘左右,待模塊充分降溫后再關閉電源;開機先開電腦再開主機,關機先關軟件再關主機和電腦,兩次開關機間隔不少于30秒,防電路沖擊。
2、每周/每月維護
除塵與散熱:每月用洗耳球、壓縮空氣或軟毛刷清理樣品孔灰塵;檢查并清理儀器背部散熱風扇、通風口的積灰,保證散熱良好(周圍留20-30cm空間,避免陽光直射)。
光路檢查:每月或懷疑光路污染時,可用洗耳球輕吹光學窗口浮塵;若有頑固污漬,用專用鏡頭紙/無塵布蘸少量光學清潔液或去離子水輕柔擦拭(禁用乙醇/有機溶劑擦光學鍍膜元件,以防損壞)。
性能核查:可定期運行標準品或背景校正程序,監控Ct值、擴增效率、基線穩定性等是否異常。
3、定期/長期維護
校準:建議每年至少1次由專業工程師或按說明書做溫度校準(精度±0.1℃)和熒光光學校準;使用頻繁可縮短至半年1次。若出現Ct值漂移、擴增曲線異常、孔間溫差大,應優先排查溫度漂移與光路污染。
耗材與環境:只用廠家推薦/兼容的光學反應板、管和封板膜;管/板側壁不要用記號筆標記(會干擾光路),可標記在管蓋或板端;環境濕度宜<85%,溫度18–30℃,配UPS防斷電。
長期不用:若長期閑置,建議每隔1-2周開機運行20-30分鐘防潮;蓋上防塵罩,避免非專業人員拆機。